Pensterilan autoklaf melibatkan tiga peringkat berbeza:
Penyingkiran Udara: Pada peringkat awal ini, autoklaf mengeluarkan udara dari ruang. Pam vakum menyedut udara, mewujudkan persekitaran tekanan rendah. Langkah ini memastikan wap boleh menembusi semua kawasan dengan berkesan dan mencapai beban untuk pensterilan yang betul.
Pensterilan: Setelah udara dikeluarkan, suhu di dalam autoklaf mencapai tahap yang betul. Stim tepu, terhasil di bawah tekanan, membunuh bakteria, virus dan mikroorganisma lain. Suhu biasa untuk pensterilan ialah 121 darjah pada tekanan 1.1 kilogram/sentimeter persegi (kg/cm²) (bersamaan dengan 15 paun/inci persegi (lb/in²)). Tempoh autoklaf berbeza-beza bergantung pada isipadu beban tetapi secara amnya dianggap sebagai 15-20 minit.
Penyejukan/Pengeringan: Selepas pensterilan, wap dilepaskan, dan autoklaf menjadi sejuk. Setelah suhu selamat, pintu dibuka, dan barang yang disteril sedia untuk digunakan.
Penyingkiran udara yang berkesan, kedudukan artikel yang betul, dan masa pemanasan yang mencukupi adalah penting untuk pensterilan autoklaf yang berjaya.