Kuantifikasi Asid Nukleat dalam Spectrophotometers
Pengkuantian asid nukleik adalah fungsi yang paling kerap digunakan spektrofotometer. Oligonukleotides, DNA terkandarkan tunggal, terkandas dua, dan RNA boleh diukur dalam buffer. Puncak penyerapan puncak tertinggi penyerapan asid nukleik ialah 260 nm. Setiap asid nukleik mempunyai komposisi molekul yang berbeza dan oleh itu mempunyai faktor penukaran yang berbeza. Untuk mengukur pelbagai jenis asid nukleik, pilih pekali yang sama terlebih dahulu. Contohnya, penyerapan 1OD bersamaan dengan 50 μg / ml dsDNA, 37 μg / ml ssDNA, 40 μg / ml RNA, dan 30 μg / ml Olig. Nilai penyerapan selepas ujian ditukarkan oleh pekali di atas untuk mendapatkan kepekatan sampel yang sepadan. Sebelum ujian, pilih prosedur yang betul, masukkan jumlah larutan saham dan pelarut, dan uji penyelesaian kosong dan sampel. Bagaimanapun, percubaan itu tidak mudah. Bacaan yang tidak stabil mungkin sakit kepala terbesar bagi pesakit. Semakin tinggi kepekaan instrumen, semakin besar drift absorbance yang dipamerkan.
Malah, prinsip reka bentuk dan prinsip kerja spektrofotometer membolehkan nilai serapan berubah dalam julat tertentu, iaitu instrumen mempunyai tahap ketepatan dan ketepatan tertentu. Seperti ketepatan Biophotometer Eppendorf ≤ 1.0% (1A). Keputusan ujian ini bervariasi antara min 1.0% dan semuanya normal. Selain itu, sifat fizikokimia dari asid nukleik, pH penimbal untuk melarutkan asid nukleik, kepekatan ion, dan sebagainya juga perlu diambil kira: Semasa ujian, kepekatan ion terlalu tinggi juga akan menyebabkan bacaan hanyut sebagai TE, yang akan menstabilkan pembacaannya. Sampel yang diencerkan sampel juga merupakan faktor yang tidak dapat diabaikan: disebabkan oleh kehadiran partikel kecil yang tidak dapat dielakkan dalam sampel, terutamanya sampel asid nukleik. Kehadiran zarah-zarah kecil ini mengganggu kesan ujian. Untuk mengurangkan pengaruh zarah pada hasil ujian, penyerapan asid nukleik diperlukan sekurang-kurangnya 0.1 A, dan penyerapannya adalah lebih baik 0.1-1.5 A. Dalam julat ini, tidak ada gelembung dalam campuran, dan tidak ada penggantungan di kosong. Jika tidak, pembacaan itu hanyut dengan ganas; cawan kolorimetrik yang sama mesti digunakan untuk menguji kosong dan sampel; jika tidak, perbezaan kepekatan terlalu besar; pekali penukaran dan unit tumpuan sampel adalah sama; Cangkuk yang dipakai oleh tingkap; jumlah sampel mestilah mencapai lebih daripada jumlah minimum yang dikehendaki dari cawan warna, dsb.
Di samping kepekatan asid nukleik, spektrofotometer menunjukkan beberapa nisbah yang sangat penting pada masa yang sama untuk menunjukkan kesucian sampel, seperti nisbah A260 / A280, untuk tujuan menilai kesucian sampel, sejak puncak penyerapan protein adalah 280 nm. Sampel tulen mempunyai nisbah lebih besar daripada 1.8 (DNA) atau 2.0 (RNA). Jika nisbah kurang daripada 1.8 atau 2.0, ia menunjukkan kehadiran protein atau bahan fenolik. A230 menunjukkan bahawa terdapat beberapa bahan pencemar dalam sampel, seperti karbohidrat, peptida, fenol, dan sebagainya. Nisbah asid nukleik tulen A260 / A230 adalah lebih besar daripada 2.0. A320 mengesan kekeruhan penyelesaian dan faktor gangguan lain. Sampel tulen, A320 umumnya 0.
Syarikat ini mengkhususkan diri dalam penjualan spektrofotometer , pelanggan yang dialu-alukan yang mempunyai keperluan untuk berunding dan membeli, kami akan menyediakan anda dengan perkhidmatan yang ikhlas dan produk yang berkualiti, serta harga yang lebih rendah.
E-mel: info@sumerlab.com
Web: sumerinstrument.com